微生物檢查是診斷由細(xì)菌、病毒感染引起的傳染性鱉病最有效的方法之一，該方法通過從鱉體直接分離病原，經(jīng)培養(yǎng)、鑒定、動(dòng)物試驗(yàn)等確定此分離物是否為該傳染性鱉病的病原以及病原的種類。

一、細(xì)菌性病原的分離與鑒定

①將瀕死病鱉用無菌水洗凈，并用70%酒精擦拭消毒，在無菌條件下解剖。

②取病鱉體表病灶、血液、內(nèi)臟器官的病變組織等，用接種環(huán)反復(fù)插入后，劃線接種于普通營養(yǎng)瓊脂平皿，倒置放人28℃恒溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)，分離純化。

③觀察各菌落形態(tài)，并挑取各菌落進(jìn)行涂片，經(jīng)革蘭氏染色和鞭毛染色后，在高倍光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)，也可取細(xì)菌培養(yǎng)物銅網(wǎng)上制膜，2%磷鎢酸負(fù)染后，用透射電鏡觀察細(xì)菌的超微結(jié)構(gòu)。

④進(jìn)行生理生化試驗(yàn)，確定分離菌株的生長適溫、理化特性。根據(jù)細(xì)菌菌落特征及菌株的形態(tài)、理化特性，參考《常用細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》、《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》等資料，確定病原菌的名稱。

⑤動(dòng)物回歸試驗(yàn)：將分離純化的菌株感染健康中華鱉，觀察是否發(fā)病及發(fā)病癥狀與自然發(fā)病癥狀是否類似；若類似，對人工感染發(fā)病的鱉重新進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定，分離鑒定出的病原與感染接種病原相同，可證實(shí)此分離菌株為該鱉病病原。

⑥藥物敏感試驗(yàn)：用紙片擴(kuò)散法檢測分離細(xì)菌病原對常用藥物的敏感程度，從而指導(dǎo)生產(chǎn)用藥。

二、病毒性病原的分離與鑒定

分離病毒的方法很多，這里介紹一種比較簡單的方法。

①解剖病鱉，取肝、脾、腎等內(nèi)臟器官，用滅菌生理鹽水洗2～3次后，剪碎，勻漿機(jī)勻漿，加人含800～1000國際單位/毫升青霉素、鏈霉素的Hank's液，制成10%～20%的組織懸液，再以2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10～20分鐘；取上清液，使其通過0.2微米的細(xì)菌濾器除菌。

②取濾液接種健康鱉，觀察動(dòng)物是否出現(xiàn)與自然發(fā)病相似的癥狀。若出現(xiàn)相似癥狀，可證明該鱉病為病毒性疾病。但要鑒定為何種病毒，需要繼續(xù)進(jìn)行電鏡觀察和特定的生理生化實(shí)驗(yàn)，確定其核酸類型和生物學(xué)特征。

③對常見病毒可進(jìn)行血清學(xué)實(shí)驗(yàn)、PCR鑒定或免疫學(xué)鑒定等。



編輯：王大偉

[原創(chuàng)]中華鱉微生物檢查的技術(shù)要求

圖文簡介

微生物檢查是診斷由細(xì)菌、病毒感染引起的傳染性鱉病最有效的方法之一，該方法通過從鱉體直接分離病原，經(jīng)培養(yǎng)、鑒定、動(dòng)物試驗(yàn)等確定此分離物是否為該傳染性鱉病的病原以及病原的種類。